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23966轉(zhuǎn)染試劑polysciences公司現(xiàn)貨

  • 發(fā)布日期:2019-03-08      瀏覽次數(shù):3294
    • 23966-2g的廠家2016年底已經(jīng)停產(chǎn),現(xiàn)在的規(guī)格是23966-1g

      Polyscience,Inc,成立于1961年,起家于化學(xué)但超越化學(xué)領(lǐng)域的美國制造商,總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓,公司業(yè)務(wù)主要涵蓋三大塊:1.實驗用產(chǎn)品:a)成千上萬種具品牌特色的化合物和試劑,應(yīng)用于實驗室研究,組織學(xué),電鏡和解剖病理學(xué)以及其他診斷和生命科學(xué)研究;b)種類極其寬廣的單體和聚合體,滿足各方研究領(lǐng)域;c)有機/無機化合物,生物可降解材料,磁珠,熒光素,染料和特定抗體,以及常規(guī)蛋白包被顆粒(直徑范圍40nm~10mm)的首要制造工廠;d)頂端多聚化合物的供貨中心,滿足各種高性能工業(yè)領(lǐng)域需求,包括替代能源,汽車電子,國防&航空電子,便攜式通信和計算機,醫(yī)療器械組裝。2. 定制合成;3.cGMP生產(chǎn)服務(wù)。

      PEI轉(zhuǎn)染手冊

      轉(zhuǎn)染操作流程:
       
        1、細胞傳代:

      轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細胞至含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進行傳代培養(yǎng),接種密度如下:
               6孔板:0.5x106細胞
               10cm培養(yǎng)皿:4.0x106細胞
               15cm培養(yǎng)皿:9.0x106細胞

      2、轉(zhuǎn)染

      轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。

      2.1質(zhì)粒DNA的稀釋

      在無菌試管中,用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基(濃度為10%)稀釋質(zhì)粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
             

      6孔板:200ul+3ug的DNA
              10cm培養(yǎng)皿:1ml+7-8ug的DNA
              15cm培養(yǎng)皿:2ml+11-12ug的DNA

         2.2 轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成

      將PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
            

       6孔板:9ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=9ug
              10cm培養(yǎng)皿:21ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=21ug
              15cm培養(yǎng)皿:33ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=33ug
      將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。


      4、收獲轉(zhuǎn)染細胞

      轉(zhuǎn)染后48小時內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細胞/或病毒上清。
       
      試劑的配制:
      PEI(1ug/ul) Polysciences(CAT#23966-2配制成儲液:)
      1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
      2、調(diào)整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃
       

      Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品,每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴格的檢測,保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實驗室因素(PH,水純度,稱量的準度,dna純度…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度,分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴
       

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